通过瞬转法将 CRISPR/Cas9 系统的 gRNA 载体(含 Cas9)与携带目标点突变的 Donor 共转入细胞中,在 gRNA 和 Cas9 复合物造成靶位点 DNA 双链断裂后,细胞以 Donor 作为模板进行同源重组修复(HDR)或以 Donor 作为供体进行非同源末端连接修复(NHEJ),将目标点突变替换到基因组靶位点。然后利用抗性完成药筛后进行单克隆筛选,通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功实现靶位点突变的阳性克隆,最终交付阳性单克隆与相关数据报告。
定点插入案例细胞类型:肿瘤细胞、常规细胞系、IPS/ES 等各类细胞
方案类型:同源重组修复(HDR)方案、非同源末端连接修复(NHEJ)方案 交
付成果:阳性单克隆
定点突变案例
EGFR
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定点插入案例
DHFR
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