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干扰慢病毒

RNA 干扰(RNA interference, RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象。shRNA 干扰模拟 miRNA 形成过程,表达 shRNA 的元件通过慢病毒进入细胞后,产生 shRNA,再被切割为 siRNA,从而获得特定基因的表达量降低。 慢病毒(Lentivirus)包装所用载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷 1 型病毒)为基础,使用疱疹病毒 VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。由于其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代,且不具有自我增殖的能力,属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点,并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。侵染宿主细胞后,慢病毒利用反转录酶将其 RNA 转录成双链 DNA,随后永久的整合到宿主细胞的染色体中,实现长时间稳定表达。 此外,慢病毒免疫原性低,不易造成免疫反应,所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系、活体动物实验中。 干扰慢病毒即通过慢病毒将表达 shRNA 的元件整合到目的细胞中,实现高效、长时间的发挥 shRNA 功能,实现目的基因有效敲降,避免了瞬转时的转染试剂的摸索、干扰不稳定等问题。