将目的基因编码区序列（CDS）克隆到人工改造的启动子下游，将该复合元件导入细胞，利用人工改造的启动子驱动目的基因 CDS 的表达。此外，可添加报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。

慢病毒（Lentivirus）包装所用载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 1 型病毒）为基础，使用疱疹病毒 VSVG 外壳蛋白发展起来的工具载体。由于其毒性基因已经被剔除并被外源性目的基因所取代，且不具有自我增殖的能力，属于假型病毒。慢病毒具有感染谱广泛特点，并且可以有效感染分裂和非分裂细胞。侵染宿主细胞后，慢病毒利用反转录酶将其 RNA 转录成双链 DNA，随后永久的整合到宿主细胞的染色体中，实现长时间稳定表达。 此外，慢病毒免疫原性低，不易造成免疫反应，所以现在慢病毒系统除了被广泛应用到各种细胞系、活体动物实验中。

过表达慢病毒即通过慢病毒将人工改造的启动子 - 目的基因 CDS 序列的复合元件整合到目的细胞中，实现目的基因高效、长时间的过表达，避免了瞬转时的转染试剂的摸索、过表达不稳定等问题。